食品中抗坏血酸检测：L型与D型如何精准测定？

更新时间：2026-03-04

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L-抗坏血酸又名维生素C，是一种水溶性维生素，具有很强的还原性。参与机体复杂的代谢过程，能促进生长和增强对疾病的抵抗力，可用作营养增补剂、抗氧化剂，也可用作小麦粉改良剂。D-异抗坏血酸与L-抗坏血酸有相似的化学性质，属于水溶性抗氧化剂。D-异抗坏血酸可以防止肉类制品、鱼肉制品、鲸肉制品、鱼贝腌制品、鱼贝冷冻品等的变质，或与亚硝酸盐、硝酸盐合用提高肉类制品的发色效果。但L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸的过量补充对健康无益，反而有害，会刺激胃肠道、引起尿路结石和诱发痛风，故需要合理使用。本方案参考《GB 5009.86-2025 食品中抗坏血酸的测定》，对某品牌的可乐进行了抗坏血酸含量的测定。

实验部分

仪器设备：Leaps超高效液相色谱仪

P60输液泵、A10C自动进样器、C10柱温箱、D10紫外检测器

标准溶液配制

L-抗坏血酸标准溶液（50 μg/mL）：准确称取L-抗坏血酸标准品10 mg(精确至0.1 mg)，用TCEP溶液溶解并定容至10mL，混匀。准确吸取上述标准溶液500 μL于10 mL棕色容量瓶中，用TCEP溶液定容，混匀。将溶液转移至棕色玻璃容器中。临用现配。

D-异抗坏血酸标准溶液（50 μg/mL）：准确称取D-异抗坏血酸标准品10 mg(精确至0.1 mg)，用TCEP溶液溶解并定容至10mL，混匀。准确吸取上述标准溶液500 μL于10 mL棕色容量瓶中，用TCEP溶液定容，混匀。将溶液转移至棕色玻璃容器中。临用现配。

标准工作溶液配制：分别准确吸取L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸标准溶液（50 μg/mL）适量，用流动相稀释成标准工作溶液，浓度分别为0.05 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10 μg/mL。临用现配。

色谱条件

色谱柱：Lotus C18（4.6 mm*150 mm，5 μm）

柱温：30 ℃

进样体积：20 μL

波长：265 nm

流动相：量取水900 mL于烧杯中，吸取40% TBAH溶液3.25 mL、称取乙酸铵3.85 g置于水中，然后加入TCEP 50 mg(或L-半胱氨酸溶液20 mL)，再加入乙腈 10 mL，混匀后用冰乙酸（约3.14 mL）调pH至 4.5~5.0；最后加水稀释至1L，混匀；超声除去气泡。

流速：1.0 mL/min

实验结果

标准溶液谱图

如图1所示，L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸对称因子均为1.1，分离度达到1.9。

图1 L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸标准溶液色谱图

（1—L-抗坏血酸； 2—D-异抗坏血酸）

线性及检出限

表1 L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸标准曲线结果表

重复性

将2 μg/mL浓度的标准溶液进样6次，重复性结果如表2所示

表2 L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸重复性结果表

回收率

对某品牌的可乐进行样本处理测试，L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸均未检出。在可乐样品中添加浓度为1 μg/mL的抗坏血酸，L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸的回收率分别为109%和111%。

图2 L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸加标溶液色谱图

结论

本应用使用Leaps超高效液相色谱仪，参考《GB 5009.86-2025 食品中抗坏血酸的测定》进行了方法学考察，线性相关系数大于0.999；L-抗坏血酸保留时间重复性为0.11%，峰面积重复性为0.39%，D-异抗坏血酸保留时间重复性为0.11%，峰面积重复性为0.90%；可乐样品中L-抗坏血酸加标回收率为109%，D-异抗坏血酸加标回收率为111%。仪器操作简单，稳定性好，灵敏度高，满足食品中L-抗坏血酸和D-异抗坏血酸含量的测定要求。