如何高效测定伏格列波糖？科诺美液相色谱-柱后衍生-荧光法来助力

更新时间：2026-02-05

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伏格列波糖是一种降糖药物，适用于改善糖尿病餐后高血糖。伏格列波糖是一种α-糖苷酶抑制剂，它可以抑制肠道内双糖酶（如蔗糖酶、麦芽糖酶和乳糖酶）的活性，从而减缓碳水化合物的分解和吸收。这样可以减少血糖的上升速度，有助于控制餐后血糖水平。由于伏格列波糖没有紫外吸收，所以在药典中采用了柱后衍生-荧光检测器检测的方法。

本应用参考《中国药典》伏格列波糖分析方法，采用氨基色谱柱、以磷酸盐缓冲液和乙腈为流动相进行分离，用牛磺酸与高碘酸钠溶液为衍生液进行柱后衍生反应，最终用荧光检测器进行检测。方法自动化程度高，稳定性好，灵敏度高，过程简便易操作，适用于伏格列波糖片中伏格列波糖的含量测定。

实验部分

仪器设备：Leaps超高效液相色谱仪

四元梯度泵P40、自动进样器A10C、柱温箱C10、荧光检测器D50、柱后衍生装置R10（1500 µL反应器）

溶液配制

磷酸盐缓冲液：取二水合磷酸二氢钠1.56 g与磷酸氢二钠3.58 g，加水1000 mL使溶解，用磷酸或*试液调节pH值至6.5。

辛烷磺酸钠溶液：称取0.12 g辛烷磺酸钠，加入37 mL磷酸盐缓冲液，再加入63 mL乙腈。

荧光反应液：取牛磺酸6.25 g与高碘酸钠2.56 g，加水溶解并稀释至1000 mL。

标准储备液（1 mg/mL）：精确称取伏格列波糖，用辛烷磺酸钠溶液溶解，制成1 mg/mL的伏格列波糖储备液。

标准曲线溶液：用辛烷磺酸钠溶液稀释标准储备液，分别得到浓度为0.1 µg/mL、0.2 µg/mL、0.5 µg/mL、1 µg/mL、5 µg/mL、10 µg/mL的标准曲线溶液。

色谱条件

流动相：A：磷酸盐缓冲液37 %；B：乙腈63 %

流速：0.8 mL/min

色谱柱：Lotus NH2 4.6 mm*250 mm, 5 µm

进样量：100 µL

柱温：40 ℃

荧光检测器：激发波长：350 nm、发射波长：430 nm

衍生液：荧光反应液，流速：0.8 mL/min，衍生温度：120 ℃

冷却管：2 m，室温（25 ℃）

实验结果

标准谱图

图1 伏格列波糖典型色谱图

线性及检出限

依次将标准曲线溶液0.1 µg/mL、0.2 µg/mL、0.5 µg/mL、1 µg/mL、5 µg/mL、10 µg/mL按浓度从低到高进样，以浓度-峰面积绘制标准曲线。伏格列波糖在线性范围内相关系数大于0.9999。

表1 线性及检出限结果表

精密度

将2 µg/mL浓度溶液重复进样6次，计算保留时间与峰面积的精密度，结果如表2所示。

表2 精密度结果表

图2 伏格列波糖精密度色谱图

结论

本应用方案采用Chromai Leaps超高效液相色谱仪，搭配R10柱后衍生装置，参考《中国药典》，使用荧光检测器对伏格列波糖含量测定方法进行方法学考察。在线性范围内，线性相关系数大于0.9999；保留时间精密度为0.15 %，峰面积精密度为1.14 %；检出限为0.012 µg/mL，满足药典要求。