饮料牛磺酸检测不准？试试柱后衍生 - 液相色谱法

更新时间：2026-05-07

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牛磺酸又称牛胆酸、牛胆碱，化学名称为2-氨基乙磺酸，是一种含硫的非蛋白质氨基酸。牛磺酸是调节机体正常生理活动的活性物质，具有消炎、镇痛、维持机体渗透压平衡、维持正常视觉功能、提高机体免疫能力、增强细胞膜抗氧化能力、保护心肌细胞等广泛的生物学功能。食品安全国家标准《GB 5009.169-2016食品中牛磺酸的测定》明确了婴幼儿配方食品、乳粉、豆粉、豆浆、含乳饮料、特殊用途饮料、风味饮料、固体饮料、果冻中牛磺酸含量的测定方法。本应用案例参考标准中第一法邻苯二甲醛（OPA）柱后衍生高效液相色谱法，使用科诺美Leaps柱后衍生色谱系统，离子色谱柱分离，OPA柱后衍生，荧光检测器检测，有效测定了饮料中牛磺酸的含量。

实验部分

仪器设备：Leaps超高效液相色谱仪

四元梯度泵P40，自动进样器A10C，柱温箱C10，荧光检测器D50，柱后衍生装置R10

标准溶液配制

牛磺酸标准储备液（1 mg/mL）：称取100.0 mg牛磺酸，用水定容至100 mL。

牛磺酸标准中间液（100 µg/mL）：取10mL牛磺酸标准储备液（1 mg/mL），用水定容至100 mL。

标准工作溶液配制：取适量牛磺酸标准中间液（100 µg/mL）用水稀释，分别得到浓度为1.0µg/mL、5.0µg/mL、10.0µg/mL、15.0µg/mL、20.0µg/mL、25.0µg/mL的标准工作溶液。

样品前处理

饮料样品：取功能性饮料2 mL于10 mL容量瓶中，用水定容。准确称取稀释后的样品5.0 g于锥形瓶中，加入50 mL偏磷酸溶液，充分摇匀，超声提取15 min，恢复到室温后，移入100 mL容量瓶中，用水定容并摇匀。在5000 rpm/min条件下离心10 min，取上清液经0.45 µm滤膜过滤后上机测试。

色谱条件

色谱柱：Lotus-AAA-色谱柱 4.6 mm*150 mm

流动相：柠檬酸三钠溶液

流速：0.4 mL/min

进样量：5 µL

柱温：55 ℃

检测波长：激发波长338 nm、发射波长425 nm

衍生流动相：OPA衍生液

衍生泵流速：0.3 mL/min

衍生温度：30 ℃

实验结果

标准溶液谱图

图1 牛磺酸标准溶液色谱图

线性关系

所示依次将标准工作溶液1.0µg/mL、5.0µg/mL、10.0µg/mL、15.0µg/mL、20.0µg/mL、25.0µg/mL按浓度从低到高进样，以浓度-峰面积绘制标准曲线。牛磺酸在线性范围内相关性好，相关系数大于0.9999。

表 1 线性数据结果表

重复性

将1.0 µg/mL浓度的标准溶液重复进样6次，计算保留时间与峰面积的重复性，如表2所示。

表2 重复性数据结果表

图2 牛磺酸重复性色谱图

检出限

将0.1µg/mL浓度的溶液进样，以信噪比S/N=3计算检出限。

表3 检出限数据结果表

回收率

按照样品前处理方法，分别将两个品牌的功能性饮料样品上机测试，测得饮料1中牛磺酸的含量为46.115 mg/100g；测得饮料2中牛磺酸的含量为46.963 mg/100g。向饮料1样品中分别加入5mg/100g和10mg/100g牛磺酸标准品，加标回收率结果如表4所示。

表4 加标回收率结果表

结论

本方案使用科诺美Leaps柱后衍生色谱系统，参考《GB 5009.169-2016食品中牛磺酸的测定》，建立了饮料中牛磺酸的含量测定方法。经验证，牛磺酸标准曲线线性良好，相关系数为1.0000；保留时间重复性0.03%，峰面积重复性0.09%；检出限满足国家标准要求，回收率在85%-100%之间。本方案可作为饮料中牛磺酸含量测定的分析方法。