Leaps AA5000 氨基酸分析仪，轻松搞定植物 21 种氨基酸含量测定

试剂：分离缓冲液A、分离缓冲液B、分离缓冲液C、再生液；衍生缓冲液，茚三酮试剂，清洗液；样本稀释液。

标准物质：17种氨基酸混标（L-天冬氨酸，L-苏氨酸，L-丝氨酸，L-谷氨酸，L-脯氨酸，甘氨酸，L-丙氨酸，L-胱氨酸，L-缬氨酸，L-蛋氨酸，L-异亮氨酸，L-亮氨酸，L-酪氨酸，L-苯丙氨酸，L-赖氨酸，L-组氨酸，L-精氨酸）（1.00 µmol/mL溶于0.1 mol/L HCl, 1mL），购自中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所；L-天冬酰胺（阿拉丁，纯度98 %）；L-谷氨酰胺（上海安谱璀世标准技术服务有限公司，纯度99.8 %）；γ-氨基丁酸（阿拉丁，纯度≥99 %）；茶氨酸（阿拉丁，纯度98 %）。

样品：xx牌龙井绿茶，xx牌茉莉花茶，xx牌红茶袋泡茶。

标准储备液（100 nmol/mL）：取1.00 µmol/mL混合标准溶液用样本稀释液稀释，配制成浓度为100 nmol/mL的混合标准储备液。

标准曲线配制：取适量混合标准储备液用样本稀释液稀释，分别得到浓度5 nmol/mL、10 nmol/mL、25 nmol/mL、50 nmol/mL、100 nmol/mL的混合标准工作液供液相色谱测定。

准确称取样品约2.0 g（精确至0.0001g）于250 mL锥形瓶中，加入200 mL沸水冲泡，95 ℃水浴加热，每隔5 min混匀一次，提取10 min后取出，趁热抽滤，滤液冷却至室温后，用水定容至250 mL，混匀后取适量样品溶液，0.45 µm水相滤膜过滤后待测。

色谱柱：除氨柱：Lotus-AAA-除氨柱 4.0 mm*50 mm

分析柱：Lotus-AAA-色谱柱 4.6 mm*150 mm

进样量：50 µL

梯度洗脱：时间程序见表1。

检测波长：一级氨基酸570 nm，二级氨基酸（脯氨酸）440 nm。

表 1 梯度洗脱时间程序

本应用中的21种氨基酸峰形良好，分离度高，标准溶液谱图如图1和图2所示。

图1 一级氨基酸标准溶液谱图（570 nm）

图2 二级氨基酸标准溶液谱图（440 nm）

依次将标准工作溶液按浓度从低到高进样，以不同浓度点为横坐标，以每个浓度点下氨基酸峰面积为纵坐标绘制标准曲线。各氨基酸在线性范围内，线性相关系数均大于 0.9998。

表1 氨基酸标准曲线结果表

同一浓度的21种氨基酸标准溶液重复进样6次，保留时间RSD%均小于0.4%，峰面积RSD%均小于1.0%，满足氨基酸测定要求。

表 2 氨基酸精密度结果表

分别对xx牌红茶袋泡茶、xx牌龙井绿茶和xx牌茉莉花茶进行测试，测试结果见表3。

图3 红茶袋泡茶样品谱图

图4 龙井绿茶样品谱图

图5 茉莉花茶样品谱图

表3 样本测试结果表